Обнаружение антиэритроцитарных антител

Очередной этап исследований, который необходимо пройти для обеспечения безопасности при переливании крови, — это обнаружение антиэритроцитарных антител у реципиентов и доноров. Антиэритроцитарные иммунные антитела формируются вследствие трансфузий инногруппных эритроцитов. В серологических тестах происходит обнаружение антиэритроцитарных антител. Для этой цели применяются различные среды: гели, коллоидные либо солевые растворы, а также растворы низкой ионной силы. Кроме того, могут использоваться специальные иммунные реагенты, к которым относится антиглобулиновая сыворотка для пробы Кумбса. При обнаружении антител необходимо придерживаться определенного температурного режима: +4 °С, +20 °С и +37 °С.

Обнаружение полных изоимунных антител сопровождается реакцией солевой агглютинации, которая может проходить при различных температурных режимах: в тепле (при температуре +37 °С), при комнатной температуре (+20 °С) или в холоде (при +4 °С). Чтобы обнаружить изоиммунные неполные антитела, применяется непрямой антиглобулиновый тест или используются коллоиды (полиглюкин, желатин).

Порядок проведения пробы Кумбса

Для проведения непрямой реакции Кумбса необходимо инкубировать сыворотку пациента, содержащую донорские эритроциты, на протяжении 45 минут. Температурный режим при этом должен поддерживаться на уровне +37 °С. Далее производится трёхкратное отмывание эритроцитов и добавление антииглобулиновой сыворотки. Спустя 20 минут можно дать оценку полученным результатам.

Чувствительность теста можно повысить. С этой целью эрироциты перед проведением теста необходимо обработать ферментами. Раствор низкой ионной силы применяется в качестве отмывающего раствора. Вступая во взаимодействие с антигенами мембраны эритроцитов иммунные антитела провоцируют возникновение лизиса, что проявляется как гемолиз различной степени.

Иммунные антитела сохраняют активность при температуре в +37° С. Также они сохраняют жизнеспособность при нагревании сыворотки на протяжении десяти минут при температуре +70 °С (нормальные антитела при таком режиме полностью инактивируются). Именно это лежит в основе реакции определения иммунных и естественных АВ0 антител.

Определение происходит по следующей схеме. 1 — 2 мл исследуемой сыворотки необходимо разбавить в четыре раза физраствором или раствором низкой ионной силы, чтобы предотвратить свертывание при нагревании.

Общий объём сыворотки делится на две равные части и наливается в пробирки. Одну из пробирок размещают на десять минут в термостате, поддерживающем температуру +70 °С. Две порции сыворотки изучают на присутствие антител в непрямой пробе Кумбса и в солевой среде. Перед исследованием сыворотку необходимо предварительно титрировать. Разведения составляют от 1:4 до 1:1024. Реакции проходят с 2 раза отмытыми в физрастворе стандартными А и В эритроцитами.

В результате данного исследования выявляется три типа антител:

  • термостабильные иммунные неполные;
  • термолабильные нормальные полные;
  • термостабильные иммунные полные.

Исходя из полученных результатов дается заключение:

  • Отсутствие иммунных антител и обнаружение нормальных полных естественных антител в титрах менее чем 1:128 говорит о том, что изоиммунизация отсутствует на момент обследования.
  • Отсутствие иммунных антител и обнаружение нормальных полных естественных антител в титрах более чем 1:128 демонстрирует повышенную сенсибилизацию организма, возникшую из-за реакции, вызванной АВ0-несовместимым антигеном.
  • Присутствие термостабильных иммунных антител (неполных либо полных) является признаком трансфузии АВ0-несовместимой эритроцитарной массы. Как правило, наблюдается невысокий титр иммунных антител: 1:32 для неполных антител и 1:8 для полных.

С помощью раствора унитиола, не действующего на антитела IgG и разрушающего антитела IgM, определяется принадлежность антител к определенному классу иммуноглобулинов.

Ход проведения теста с использованием раствора унитиола:

  1. Смешать в соотношении 5:1 сыворотку с пятипроцентным раствором унитиола.
  2. Применять для контроля смесь изотонического физраствора и сыворотки.
  3. Установить смесь сыворотки и контроль в термостат при температуре 37 °С.
  4. Инкубировать смесь и контроль на протяжении четверти часа, провести исследование со стандартными эритроцитами.
  5. Если в опытном образце отсутствует агглютинация, а в контроле она наблюдается, можно утверждать, что антитела относятся к классу IgG.

Кроме того, класс иммуноглобулинов можно установить посредством антиглобулинового теста, применяя гелевые карты производства «ДиаМед».

Добавить комментарий